MEDIO
DE CULTIVO PARA PROPAGACIÓN DE PLANTAS VITRO
Qué es?
Composición artificial o sintética
que permite la instalación, permanencia y desarrollo de un explante (parte que
se toma de la planta fuente o madre), para el cumplimiento de un objetivo.
También se puede complementar con
sustratos orgánicos.
Cuál su relación con la situación
In Vivo?
Reemplaza o sustituye, ya sea al
suelo como soporte y dador de nutrientes, como al endospermo de una semilla de
origen sexual.
Qué es un Medio Básico?
Es aquel que contiene los elementos
básicos para la nutrición de un explante, que garantice no solo su permanencia
sino también su evolución de acuerdo al objetivo propuesto.
¿Se puede modificar?
De acuerdo al objetivo propuesto, se le pueden adicionar elementos como
las hormonas, promotoras o inhibidoras, aumentar o disminuir la concentración
de algunos de sus componentes básicos o agregarle sustratos de origen orgánico;
esto se conoce también como enriquecimiento del medio de cultivo (Medio Modificado).
Y, Cómo es su composición?.
« Agua: esta debe de ser destilada
y si las posibilidades lo permiten, desionizada, lo que nos garantizará una
agua de muy buena calidad.
«Sales minerales
Macroelementos esenciales: N, P, K, S, Ca, Mg.
Microelementos: Fe, Na, Cl, Mn, Zn, B, Mo,
Ni.
«Aminoácidos: fuentes de nitrógeno reducido, rápidamente reducido,
para la construcción de proteínas. Eje.
Glutamina, Asparagina, Adenina.
«Vitaminas
° Tiamina (B1)
° Ácido nicotínico (B3)
° Pyridoxina (B6)
° Myo-Inositol
° Ácido ascórbico (C)
° Ácido pantoténico
Se pueden aplicar
individualmente o en grupos de acuerdo a las necesidades.
«Reguladores
de crecimiento: de carácter endógeno y exógeno.
Auxinas
Promotores Citoquininas (Citocininas)
Giberelinas
Ácido Absícico
Inhibidores Etileno
otros
Auxinas
Ácido Naptalen Acético (ANA), Ácido Indol Butírico (IBA), 2, 4-D., Zeatina, etc. Implícitas tanto en la división como en la elongación celular y el enraizamiento.
Citoquininas
Participan de la división celular e inducen la brotación de yemas axilares y adventicias. Kinetina; 2i,p; 6-bencil Amino Purina (6-BAP); otros.
Giberelinas
Intervienen en la división celular en interacción con auxinas, promueven
las estructuras florales y pueden definir la característica sexual de las
flores; existen más de 100 giberelinas siendo las más activas GA1; GA3 y GA4.
Se sintetizan en frutos, semillas en desarrollo, tejidos jóvenes y puntos de
crecimiento apical. Inducen alargamiento celular y germinación de semillas
sexuales.
«Azúcar. Fuente de energía, que
actúa a la vez como regulador osmótico;
existen diferentes fuentes como la Glucosa, la Sacarosa (reactiva), pero las
más usadas son las normales como el azúcar de meza. La proporción a usar esta
en el rango del 2 al 5%.
«Compuestos (sustratos) orgánicos
Son aquellos
cuya fuente son extractos de partes de una planta, especialmente los frutos; su
composición, aparte de ser variable, es indefinida, por lo que se utilizan con
empirismo y/o protocolos ya establecidos. Ejemplos, el extracto de papa, jugo de piña-tomate-piña, entre otros y
el agua de coco (endospermo líquido).
«Carbón activado.
Reactivo de origen vegetal, donde la mejor fuente es la “mecha o barba” del
fruto del cocotero. Se utiliza en esta técnica como “recogedor” de la oxidación
al capturar los fenoles y polifenoles producidos por algunos explantes en el
cultivo In Vitro a causa de las heridas de los mismos o simplemente por su
composición química y su reacción con el medio de cultivo.
Se ha encontrado con el
tiempo, que retiene parte de las auxinas aplicadas exógenamente al medio de
cultivo, especialmente el AIA.
«Agar. Su fuente primordial son
las algas marinas, lo que les da el carácter de compuestos orgánicos, aunque
con bajísima incidencia en la relación nutricional del medio de cultivo;
también las hay de origen sintético (reactivas o sintéticas).
Su papel es el de dar soporte al explante al ser este de características
oxigénicas (aerobias), por tanto, de acuerdo a su tipo y objetivo del trabajo,
su consistencia puede ser sólida o semisólida; se agregan como último paso en
la preparación del medio, al momento de iniciarse la ebullición, evitando la
formación de grumos, al ser un almidón (polímero), agitando vigorosamente.
También se puede usar líquido, sin soporte, pero para evitar la muerte
del explante por sus condiciones ya descritas, se le induce un movimiento o
agitación controlada (r.p.m. adecuadas), ya sea de tipo vertical u horizontal;
actualmente se maneja el sistema RITTA, que consiste en inmersiones o “baños”
controlados con medio de cultivo que puede contener determinados nutrientes,
hormonas u otros compuestos; estas inmersiones son controladas tanto en su
velocidad de llegada como de salida, como en su tiempo de permanencia, para lo
cual se utiliza una bomba de vacío; también se pueden introducir al sistema
sustancias como el CO2 y a la vez extraer otras como el etileno que
se pueden volver fitotóxicas, conllevando a una altísima tasa de producción de
plántulas (micropropagación).
«pH. Es muy importante su manejo
de manera tal que permita la correcta absorción de los nutrientes para el logro
de los objetivos propuestos; se maneja un rango universal entre 5.0 a 6.5.
Un pH inferior a 5.0,
genera problemas en la inestabilidad de hormonas como las Auxinas y las Giberelinas, pérdida de
rigidez del medio lo que se conoce como licuefacción del mismo y precipitación
de sales, entre otros.
Cuando el medio se
esteriliza por autoclavado, su pH se reduce entre 0,3 a 0,5 unidades; se ajusta
ya sea con NaOH para “subirlo” o “bajarlo” con HCl en una normalidad baja, ya
sea 0,1 o 1N (Normal).
Esterilización: esta se
puede realizar por autoclavado (calor húmedo) o por la combinación química y
física que consiste en someter al medio de cultivo ya elaborado, a ebullición e inmediatamente
someterlo a la acción del hipoclorito de sodio (NaClO) en una concentración del
1%, que se puede hacer directamente en el frasco de siembra (a este se le
aplica el NaClO) y se tapa de inmediato, lo cual resulta en un método muy
eficiente.
Elaborado por el Ing.
Agrónomo DARIO GARAVITO GARAVITO
FUENTES:
. Micropropagación y
proyectos de producción. Facultad de Agronomía. Depto. de Biología Vegetal.
. hormonas_2008.pdf (protegido)-adobe
Reader
. Cruz Aguilar, M; Melgarejo, Luz Marina; Romero,
Mauricio. Fitohormonas. Hormonas.
Pdf-Adobe Reader.
. Jordán, Miguel; Casaretto, José. Hormonas y
reguladores del Crecimiento: auxinas,
Giberelinas y Citocininas. Fisiología vegetal (F.A. Squeo & L. Cardemil,
eds.) Ediciones Universidad de La Serena, La Serena, Chile (2006) 15: XX-XX
. Auxinas. Pdf-adobe Reader.
. Experiencia personal. Ing. Agrónomo. Garavito, G,
Dario.2014.
